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我國科學(xué)家研發(fā)出高階多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測技術(shù)

來源:上海西遞實(shí)業(yè)有限公司 發(fā)布時(shí)間:2022-08-22

實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是目前應(yīng)用最為廣泛的核酸檢測技術(shù)。然而,由于主流熒光PCR儀器檢測通道數(shù)目的限制,單個(gè)反應(yīng)所能檢測的靶基因數(shù)目很難超過6個(gè),限制了該技術(shù)在檢測涉及多靶點(diǎn)的復(fù)雜疾病上的應(yīng)用。

2月24日,廈門大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)在《美國國家科學(xué)院院刊》(PNAS)雜志上發(fā)表了題為“Highly multiplex PCR assays by coupling the 5’-flap endonuclease activity of Taq DNA polymerase and molecular beacon reporters”的文章,研發(fā)出了一種稱為“MeltArray”的熒光PCR新技術(shù),將熒光PCR的單管檢測能力提高了至少一個(gè)數(shù)量級。

該技術(shù)利用了熒光PCR反應(yīng)中Taq DNA聚合酶的5‘-瓣?duì)顑?nèi)切酶活性,將位于引物下游的“媒介探針”切割,釋放出“媒介引物”,“媒介引物”結(jié)合到反應(yīng)體系中的分子信標(biāo)報(bào)告探針上。在Taq酶聚合活性作用下,“媒介引物”沿著分子信標(biāo)延伸,生成具有特定熔點(diǎn)值的熒光雙鏈。由于每個(gè)分子信標(biāo)可以允許多個(gè)“媒介引物”形成一系列具有不同熔點(diǎn)值的熒光雙鏈,單個(gè)MeltArray多重?zé)晒釶CR反應(yīng)可檢測的總靶基因數(shù)目就等于反應(yīng)中分子信標(biāo)數(shù)量乘以其所容納的“媒介引物”數(shù)量。研究團(tuán)隊(duì)實(shí)現(xiàn)了單個(gè)熒光通道可檢測12個(gè)靶標(biāo),6個(gè)熒光通道的儀器可檢測72個(gè)靶標(biāo),這是單個(gè)閉管實(shí)時(shí)熒光PCR一步法目前所能檢測的最大靶基因數(shù)量。

該研究證實(shí)了MeltArray多重?zé)晒釶CR技術(shù)在不改變現(xiàn)有儀器設(shè)備的情況,在遺傳病、傳染病和腫瘤的分子診斷上都有良好靈敏度和特異性,成功推動熒光PCR這一“老技術(shù)”再上“新臺階”,填補(bǔ)了長期存在于低階PCR和高通量檢測二者之間的技術(shù)空白。

來源:科技部生物中心

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